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大鼠細胞核因子kb受體活化因子配體(RANKL)Elisa試劑盒說明書

更新時間:2011-05-03      瀏覽次數(shù):1805

 

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷。
 
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠細胞核因子kb受體活化因子配體(RANKL單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物AB,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠細胞核因子kb受體活化因子配體(RANKL濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中大鼠細胞核因子kb受體活化因子配體(RANKL含量。

11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【大鼠細胞核因子kb受體活化因子配體(RANKL)Elisa試劑盒樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
【大鼠細胞核因子kb受體活化因子配體(RANKL)Elisa試劑盒注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為18.75-600pmol/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(18.75-600pmol/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
8、試劑盒保質期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
 
【大鼠細胞核因子kb受體活化因子配體(RANKL)Elisa試劑盒操作程序總結】
 
準備試劑,樣品和標準品
 

 
加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
 
洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
 
洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計算
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